【お客様事例】MyTaq™ Extract-PCR Kitを用いた マウスジェノタイピング解析

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本データは、大阪公立大学 大学院医学研究科 分子病態薬理学教室 本間 拓二郎 様のご厚意により掲載させていただきました。

実験概要

マウスでのジェノタイピングは、日常で行われることが多い操作であり、ジェノタイピングには、耳や尻尾からのDNAを抽出して行うことが主流です。
DNA抽出は、通常、サンプルはプロテイナーゼKとともに数時間または一晩インキュベート後、精製を行います。このプロトコルは、より高いDNA濃度と品質の抽出物を生成しますが、手間と時間がかかります。
本アプリケーションで使用したMyTaq™ Extract-PCR Kitは、プロテイナーゼKを使用したDNA抽出でありながら、DNA抽出からPCRまで最速120分で完了するキットとなります。また、必要な試薬がすべてセットとなっており、簡便に操作を行うことが可能となっております。
本アプリケーションノートでは、野生型マウスおよび遺伝子改変マウスの尾（約2 mm）からMyTaq™ Extract-PCR Kitを用いてDNAを抽出後、添付の酵素を用いてPCR反応を行い、増幅するか確認を行いました。

MyTaq™ Extract-PCR Kitの操作と必要時間

MyTaq™ Extract-PCR Kitを使用することで、大幅に操作時間を短縮できる

実験方法

• 使用試薬
  MyTaq™ Extract-PCR Kit（meridian BIOSCIENCE / Cat.No. BIO-21126）
• サンプル
  野生型マウスの尾 2 mm程度
  遺伝子改変型マウスの尾 2 mm程度
• 使用機器
  PCR装置
  Mupid-2x（株式会社ミューピッド / Cat.No. AD115）
• 抽出方法
  1. 尾を反応溶液（Buffer A 20 μL、Buffer B 10 μL、ddH₂O 70 μL)中で75℃、10分間反応させた（3分ごとに撹拌した）。
  2. 95℃で10分間反応させた。
  3. 15,000 × gで1分間遠心した。
  4. 上清を新しい1.5 mLチューブに回収した。
• PCR
  反応組成

  		Final Con.
  DW	6.5 μL
  Master Mix（2x）	12.5 μL
  野生型アレル検出用primer set（Forward & Reverse）	2.5 μL	各0.5 μM
  変異型アレル検出用primer set（Forward & Reverse）	2.5 μL	各0.5 μM
  Template	1 μL	抽出したDNAをTE bufferにて2倍希釈したもの
  Total	25 µL

  反応プログラム

  		Time
  Pre-incubation	95℃	180 sec
  Amplification	95℃	15 sec	×35 cycles
  	62℃	30 sec
  	72℃	20 sec

結 果

操作も簡便で、迅速に結果を得ることが出来るため、有用な試薬である。

この記事で紹介した製品

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