【お客様事例】MycoBlue Mycoplasma Detectorを用いた様々な培養細胞におけるマイコプラズマ汚染の検出

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アプリケーションノート 2022<19>
製品名:MycoBlue Mycoplasma Detector(Cat.No.D101-01、D101-02)
メーカー名:Vazyme Biotech Co., Ltd.

下記のデータは、関西医科大学 がん多細胞コミュニケーション学社会連携講座 山家 良介 様のご厚意により掲載させていただきました。

概要

マイコプラズマは、細胞内に感染することで、細胞代謝などに影響を及ぼし、実験の結果にも影響を与える可能性がある。このため、細胞培養においてマイコプラズマをモニタリングすることが求められている。しかし、従来の方法ではPCR等で検出を行うため、作業に手間や時間がかかっている。
MycoBlue Mycoplasma Detectorは、PCRやqPCRの操作が不要で、反応溶液の色調変化によりマイコプラズマの汚染を迅速に目視で検出できるキットである。なお、感度は5×105 cfu/mLであり、日々の簡易確認試験等に使用することを想定した製品である。
本資料は、多種のサンプルでマイコプラズマの検出を行った運用方法の事例である。

評価方法

評価方法
製品紹介
MycoBlue マイコプラズマ検出キット
MycoBlue Mycoplasma Detector
接着細胞と浮遊細胞どちらにも使用することができ、最大28種類のマイコプラズマを検出することが可能です。
反応溶液の色調の変化により、目視で簡便に結果を判定することができます。

  • キット構成内容
    MycoBlue Buffer
    Positive Control
    MycoBlue Enzyme
    Paraffin Oil
サンプル

以下の細胞培養液をサンプルとして使用した。

細胞名 Mewo SCC-25 HSC-3 HMMME HT-29 口腔線維芽 HCC-1937
動物種 ヒト ヒト ヒト ヒト ヒト ヒト ヒト
由来 皮膚
メラノーマ
口腔
扁平上皮癌
口腔
扁平上皮癌
胸膜
中皮腫
大腸
腺癌
口腔
線維芽細胞
乳腺
乳癌
培地 E-MEM F-12+DMEM E-MEM F-12 McCoy’s 5a D-MEM RPMI1640
FBS 10% 10% 10% 15% 10% 15% 10%
抗生物質
(ペニシリン/ストレプトマイシン)
(-) (-) (-) (-) (-) (-) (-)

 

細胞名 KPL-1 T47D MDCK HCT-116 C17 Sf9  
動物種 ヒト ヒト イヌ ヒト マウス ヨトウガ  
由来 乳腺
乳癌
乳腺
乳癌
腎臓
尿細管上皮
結腸
腺癌

神経幹細胞様
卵巣

 
培地 D-MEM D-MEM D-MEM McCoy’s 5a D-MEM Sf-900  
FBS 10% 10% 10% 10% 10% 5%  
抗生物質
(ペニシリン/ストレプトマイシン)
(-) (-) (-) (-) (-) (-)  

結果

2022<19>結果1
チューブNo. 細胞名 結果
1 Negative Control
2 Mewo
3 SCC-25
4 HSC-3
5 HMMME
6 HT-29
7 口腔線維芽
8 HCC-1937
9 Positive Control
2022<19>結果2写真では色調が似通っているが、目視では判別可能であった。
チューブNo. 細胞名 結果
1 Negative Control
2 KPL-1
3 T47D
4 MDCK
5 HCT-116
6 C17
7 Sf9
8 Positive Control
まとめ
培養細胞の種類によらず反応溶液の色調の対比でPositive/Negative判定が可能であった。
お客様のコメント
今後、日々の検査で使用可能と思われますが、当研究室には高価な細胞株があまりないため、コンタミ疑い時は廃棄処分になります。学生が長期培養時に簡易確認試験で使える可能性はあると思います。

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