アップグレードされた断片化酵素ミックスにより、さまざまな課題を解決します。

ロシュ・ダイアグノスティックス社より、ライブラリー調製キット KAPA EvoPlus Kitが新発売！
一般的な酵素的断片化によるライブラリー調製ではアーティファクトが必然的に生じますが、KAPA EvoPlus Kitは新しい断片化反応を採用することでアーティファクトの発生を抑制し、物理的断片化による方法と同等の信頼できるシーケンスが取得できます。

この記事で紹介した製品

KAPA EvoPlus Kit

製品特長

アーティファクト（人工的な変異）の発生を低減
EDTAなどインヒビターの影響による断片化サイズのばらつきを改善
フラグメンテーションとAテーリングを統合した簡便なステップ
操作時間を短縮（おおよそ２時間）
サンプルインプットレンジは10 ng ～ 500 ng（PCRフリーライブラリーは 75 ng以上から可能 *）
プレートフォーマットタイプを新しく追加、完全に自動化可能なワークフローをご提供します。

*全ゲノムシーケンス、高品質gDNA、ダブルサイズセレクションをしていない、フルレングスアダプターを使用する、などの条件を満たす必要があります。

製品情報

CatNo.	製品名	単位	価格（税抜き）
KAPA EvoPlus Kit
09420037001	KAPA EvoPlus Kit / KAPA Library Amp Primer Mix（型番：KK2623）付 ※1	24反応	¥118,000
09420053001	KAPA EvoPlus Kit / KAPA Library Amp Primer Mix（型番：KK2623）付 ※1	96反応	¥398,000
09420339001	KAPA EvoPlus Kit / KAPA Library Amp Primer Mix（型番：09420410001）付 ※2	384反応	¥1,528,000
KAPA EvoPlus Kit（PCR-free）
09420045001	KAPA EvoPlus Kit（PCR-free）	24反応	¥112,000
09420304001	KAPA EvoPlus Kit（PCR-free）	96反応	¥380,000
09420371001	KAPA EvoPlus Kit（PCR-free）	384反応	¥1,468,000
KAPA EvoPlus Kit （プレートフォーマット）
09420428001	KAPA EvoPlus Kit（プレートフォーマット） / KAPA Library Amp Primer Mix（型番：09420479001）付 ※3	96反応	¥458,000
09420436001	KAPA EvoPlus Kit （プレートフォーマット/PCR-free）	96反応	¥437,000
KAPA Hifi HotStart ReadyMix
09420398001	KAPA Hifi HotStart Ready Mix	9.6 mL	¥93,000
KAPA Library Amp Primer Mix
09420410001	KAPA Library Amp Primer Mix	384反応	¥36,000
09420479001	KAPA Library Amp Primer Mix（プレートフォーマット）	96反応	¥12,000

※1・※2・※3：KAPA Library Amp Primer Mix　無償添付

※価格は2022年2月現在のものです。

カパエボプラスキット| 日本ジェネティクス株式会社製品検索

詳細を見る ▸

信頼性の高いシーケンスが得られます

■ストランドスプリットアーティファクトリード（SSARs）の抑制

KAPA EvoPlus Kit、KAPA HyperPrep Kit、NEBNext^® Ultra™ II FS、QIAseq FXで500 ngのヒトゲノムからライブラリーを調製し（ダブルサイズセレクションを実行）SSARs（キメラリードの1種であり、部分的に連続しないゲノム配列で構成されるリード）の割合を調べたところ、KAPA EvoPlusライブラリーに存在するSSARsの割合は、KAPA HyperPrepライブラリー（業界のゴールドスタンダードと見なされます）と同等であり、ゼロに近いことが確認されました（0.002％）。

■キメラの抑制

KAPA EvoPlus Kit、KAPA HyperPrep Kit、NEBNext^® Ultra™ II FS、QIAseq FXで500 ngのヒトゲノムからライブラリーを調製し（ダブルサイズセレクションを実行）、キメラリードの割合を調べたところ、KAPA EvoPlusライブラリーに存在するキメラの割合はKAPA HyperPrepライブラリーと同等のレベルで低いことが示されました。

■高い正確性のバリアントコール

コールされた全てのバリアントからSNPsとインデルのPPVsを調べたところ、KAPA EvoPlus KitによるライブラリーのPPVsはKAPA HyperPrepライブラリーと同等であることが示されました。

安定したサイズのライブラリーが得られます

■さまざまな投入量で再現性のある酵素的断片化が可能

ヒトゲノムDNA（10 ng、100 ng、500 ng）を37℃で断片化したところ、いずれの条件においてもモードインサートサイズが約300 bpのライブラリーが調製されることが示されました。
この検証実験ではフルレングスアダプター（KAPA UDIアダプター）を用いたKAPA EvoPlusワークフローを実施し（サイズセレクションなし）、2サイクルの増幅を行ったものをLabChip GX Touch HTとHT DNA HiSens Reagent Kit（PerkinElmer）で泳動しました。

■ゲノムDNA溶液のバッファーの種類に関わらず再現性のある酵素的断片化が可能

10 mM Tris-HClまたは10mM Tris-HCl、1 mM EDTAに溶解したヒトゲノムDNA（500 ng）を37℃で断片化したところ、どちらの条件においてもモードインサートサイズが約300 bpのライブラリーが調製されることが示されました。

ライブラリー調製がより簡単に

■断片化とAテーリングを統合した「Frag Tail Step」を採用

KAPA EvoPlus Kitでは断片化とAテーリング反応を一つのステップで（Frag Tail Step）行います。また、ラボのニーズによりチューブフォーマットかプレートフォーマットタイプから選択していただけます。

* 本キットにはアダプター試薬は含まれておりませんので、別途ご用意ください。

GCバイアスの少ない結果が得られます

■GCバイアスが小さく、物理的断片化と同等の均一なカバレッジ

各キットを使用してライブラリー調製を行いカバレッジのGCバイアスを調べたところ、KAPA EvoPlus KitはKAPA HyperPrepと同等のパフォーマンスを示す事が明らかとなりました。酵素的断片化を用いたNEBNext^® Ultra™ II FSとQIAseq FXのワークフローでは、それぞれGCリッチ領域、ATリッチ領域とGCリッチ領域の両方でパフォーマンスが低下していました。