最大384種類のインデックスに対応！低コスト/短時間で複数ライブラリー調製が可能に。
KAPA UDI Primer Mixesは、KAPA Universal Adapterと組み合わせて使用することでライブラリー調製ができる、PCRベースのアダプター試薬です。次世代シーケンシング（NGS）用に個々のサンプルから一意にインデックスが付加されたライブラリーを調製することができます。
この度、97～384インデックスタイプが3セットに分かれて追加発売されました。
KAPA UDI Primer Mixes
KAPA UDI Primer Mixesは、フォワードプライマーとリバースプライマーが事前に混合されています。プライマーには、イルミナシーケンサーのインデックスミスアライメント（「インデックスホッピング」）を軽減するように設計された個別の8ヌクレオチドインデックスが含まれています。
固有のインデックスを付加する事により、ターゲットキャプチャまたはクラスター形成の前にライブラリをプールして、マルチプレックスシーケンスに適したライブラリー調製が可能となります。このため、ハイスループット化に対応、解析コストを抑えることができます。多検体処理が必須なアプリケーションに是非ご利用ください。
(KAPA Hyper Kit シリーズで使用する事が可能です。)
KAPA UDI Primer Mixes
- 最大384種類のインデックスに対応
- インデックスホッピングに対応したユニークデュアルインデックス
- PCRベースのインデックスキットでコストが安価
- KAPAライブラリー調製キットでのバリデーション済み
KAPA Universal Adapter
KAPA Universal Adapterは、イルミナプラットフォームでのシーケンスを目的としたライゲーションベースのアダプターです。KAPA UDI Primer Mixesと共に使用し、DNAサンプルからユニークにラベル付けされたライブラリーを調製する事が可能です。
オーダー情報
| CatNo. | 製品名 | 単位 | 価格（税抜き） |
|---|---|---|---|
| 9134336001 | KAPA UDI Primer Mixes, 1-96 | 96反応 | ¥65,000 |
| 9329838001 | KAPA UDI Primer Mixes, 97-192 | 96反応 | ¥65,000 |
| 9329846001 | KAPA UDI Primer Mixes, 193-288 | 96反応 | ¥65,000 |
| 9329854001 | KAPA UDI Primer Mixes, 289-384 | 96反応 | ¥65,000 |
| 9063781001 | KAPA Universal Adapter, 15 µM 960 µL | 960 µL | ¥11,000 |
※価格は2021年11月現在のものです。
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テクニカルノート
KAPA Universal Adapter & UDI Primer Mixesを用いたライブラリ調製ワークフロー
KAPA Universal Adapter & UDI Primer MixesとKAPA HyperPlus Kitの組み合わせでライブラリー調製が可能かを検証しました。
実験方法
実験条件
| サンプル | ： | 菌株由来genome DNA 2 種（北里大学様からご提供いただいたサンプル） |
| DNeasy Blood & Tissue kit（QIAGEN）にて抽出し、アガロース電気泳動でDNAの分解が無い事を確認済 | ||
| ① C. jejuni gDNA | ||
| ② R. equi gDNA | ||
| インプット量 | ： | 100 ng |
| アダプター濃度 | ： | 15 µM（モル比 アダプター：インサート=100：1） |
| 断片化条件 | ： | 37 ℃ 30 分（インサートサイズ 200 bpに設定） |
| PCR cycle | ： | 5 cycles |
| 使用プロトコール | ： | KAPA HyperPlus Kit KR1145 – v8.21 |
| KAPA HyperCap Workflow v3.0 |
結果：ライブラリーQC
サイズ測定
機器： Agilent 2100 バイオアナライザ電気泳動システム （アジレント・テクノロジー株式会社）
試薬：High Sensitivity DNA kit（Chips & Reagents）（ Cat. Code:5067-4626 アジレント・テクノロジー株式会社）
濃度測定
| サンプル名 | 濃度 （ng/μL） |
収量（ng） | Ave,Size（bp） | Peak Top（bp） | Molarity（nM） |
|---|---|---|---|---|---|
| C. jejuni gDNA | 50.09 | 1502.8 | 408 | 400 | 198.7 |
| R. equi gDNA | 39.25 | 1177.4 | 389 | 367 | 163.2 |
機器：Light Cycler® 96システム（ ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社）
試薬：KAPA Library Quantification Kits Illumina/Universal（Cat.No. KK4824）
結果：両サンプルでシーケンスに必要な十分量のライブラリを得る事ができた。
KAPA Universal Adapter & UDI Primer Mixesは、KAPA Hyper Plus Kitのプロトコールで使用できる。
詳しくは、2021〈05〉のテクニカルノートをご覧ください。
この記事で紹介した製品
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