日本ジェネティクスのアプリケーションノートとは？
- 当社製品を実際にご使用頂いた、正真正銘、日本国内の研究者様による評価データ
- 製品をご検討中の方はもちろん、すでにお使いのお客様におかれましても、類似の研究をされている他の研究者の方の事例集としてご活用頂けます
アプリケーション検索専用ページはこちら
| アプリケーションノート 2019＜11＞ 製品名：TwistAmp® exo（Cat.No. TAEXO02KIT） メーカー名：TwistAmp® |
下記のデータは、株式会社 生物技研 事業開発部 半田 佳宏 様のご厚意により掲載させて頂きました。
背 景
TwistAmp® exoは、RPA増幅技術※とRPA用にデザインした蛍光プローブを組み合わせて、蛍光検出システム（T8-ISO等温増幅装置を推奨）で検出するキットです。
本アプリケーションノートでは、推奨の装置を用いずに、一般的なリアルタイムPCR装置を用いて、蛍光を検出した一例をご紹介します。
本アプリケーションノートでは、推奨の装置を用いずに、一般的なリアルタイムPCR装置を用いて、蛍光を検出した一例をご紹介します。
※RPA増幅技術とは
RPAとは、リコンビナーゼポリメラーゼアンプリフィケーションの略で、RPA増幅は迅速かつ、高感度で核酸検出が可能な等温増幅技術です。
少量の核酸分子で10 分～ 20 分のうちに検出可能なレベルまで増幅することができます。従来のPCR法に比べて温度を上げてディネーチャーを行ったり、温度を下げてアニーリングを行ったりする必要がないので、短時間で反応することができます。また、LAMP法に比べて低い温度で増幅することができます。
方法
震生湖と渡良瀬遊水地の水（1 L）をステリべクスを用いてろ過を行い、DNA抽出を行った。その後、MPureを用いて、DNAを精製後、TwistAmpに使用した。
| SAMPLE Primer A （10 uM） 2.1 μL Primer B （10 uM） 2.1 μL Probe（ 10 uM） 0.6 μL Primer Free Rehydration buffer 29.5 μL DNA Template 2.0 μL Water 11.2 μL MgOAc （後入れ） 2.5 μL Total 50.0 μL |
POSITIVE CONTROL |
| Lepomis macrochirus（ブルーギル） Primer A 5’- CCTAGGCCTCTGCCTAGCAACCCAGATTTTAACA – 3’ Primer B 5’- ATTACGGATAAGTCATCCGTAATTCACGTCCCGG – 3’ Probe 5’- TGCCATACACTACACCTCCGACATCGCAAC[FAM-dT][dSpacer]CC[BHQ-dT]TCT- - CTTCAGTAGCAC[C3-spacer] – 3’ |
|
結果
定量PCRの系から震生湖からブルーギルDNAが検出され、渡良瀬遊水地から検出されていない。
今回のTwistAmpの結果は、定量PCRの結果と一致した。
今回のTwistAmpの結果は、定量PCRの結果と一致した。
- こちらのアプリケーションノートのPDFダウンロード ： こちら
- 製品情報詳細ページ： TwistAmp® exo
- アプリケーションノート検索ページ（型番・キーワード・アプリケーションから検索可能）
また、PCR阻害物質を含む環境DNA溶液でもDNAが増幅されたことから、増幅阻害に強い反応系と考えられる。