【お客様事例】DNA Save ペーパーを用いたマイコプラズマ培養液由来DNAの抽出および保存

日本ジェネティクスのアプリケーションノートとは？

当社製品を実際にご使用頂いた、正真正銘、日本国内の研究者様による評価データ
製品をご検討中の方はもちろん、すでにお使いのお客様におかれましても、類似の研究をされ粗抽出ている他の研究者の方の事例集としてご活用頂けます

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アプリケーションノート　2019＜03＞
製品名：FastGene™ DNA Save ペーパー（FG-GDS4）
メーカー名：日本ジェネティクス株式会社

下記データは、道立総合研究機構畜産試験場家畜衛生グループ山口英美様のご厚意により掲載させていただきました。

FastGene™ DNA Saveペーパー（FG-GDS4）

特長
●常温での長期間の安定的なDNA保管が可能

●洗浄ステップ不要のダイレクトPCR分析が可能

　実験フローチャート　

本実験では、DNA Save ペーパーを評価対象として、Instagene™（BIORAD #7326030）で抽出・精製を行った。

　結果　

●結果
DNA Save ペーパーで保存した場合においても、Instagene™精製後
PCR増幅した場合と同じ分子サイズのPCR産物が増幅された。

＜注意＞
本実験は、菌数などテンプレート量を管理してPCRを行ったデータではないため、バンド輝度に
基づくDNA量の情報を比較できない点はご注意ください。

●結論
• DNA Save ペーパーにスポットするだけで、マイコプラズマのDNAをPCRで増幅可能な状態にすることができた。
• かつ、この状態のまま、マイコプラズマDNAの保存が可能であることがわかった。
※特定の保存期間を保証する結果ではない点はご注意ください。

ペーパーの上に試料液を落とすだけで、マイコプラズマよりDNAを抽出し、保存できたので、非常に楽でした。また、紙として保存するので、冷凍庫のスペースをとらないことが便利で、博物資料など、それなりの量を長期保存する場合などに良いと思います。

　詳細実験条件および試薬・器具情報　

● マイコプラズマ（Mycoplasma bovis）培養
培養液　： Hayflick 液体培地
培養液量： 5 ｍL
容器　　： 15ml 遠沈管（Trueline® #TR2001, FastGene™ #FG400）
培養方法： -80℃保存菌株よりニードルで釣菌し、37 °C培養液中で3日間培養した。

● PCR反応液組成
KAPA2G™ Fast HotStart ReadyMix with dye 5 μL
蒸留水 3 μL
10 μM Forwardプライマー 0.5 μL
10 μM Reverseプライマー 0.5 μL
PCRテンプレート 1 μL
反応液 10 μL
※DNA Save paper をサンプルとした場合は、蒸留水を1 μL 添加。

● PCRサイクル
95°C, 3 min
　↓
(95°C, 15 sec → 60°C, 15 sec → 72°C, 5 sec)×35サイクル
　↓
72°C, 1 min
　↓
12°C, ∞

● PCR装置
PCR装置名：Biorad icycler

● 電気泳動条件
ゲル　　　　：1.5％アガロースゲル
バッファー　：TAE
泳動条件　　：100 V，30分
核酸染色試薬：エチジウムブロマイド
ゲル撮影装置：Gel Doc™ XR+（BIORAD #1708195）

日本ジェネティクス株式会社担当者より一言

これまでDNA Save ペーパーは、血液サンプル由来のDNA抽出・保存において使用可能であることは検証済みとなっております。
本アプリケーションノートにおいて、DNA Save ペーパーが、マイコプラズマにおいても使用可能であることがわかりました。
このことは、DNA Save ペーパーが、幅広い細胞種のDNAを抽出・保存ができるアプリケーションである可能性を示しています。