【製品性能評価】新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）の抽出評価試験

日本ジェネティクスのテクニカルノートとは？

発売したばかりの新製品の性能評価や、既存製品の最適な条件を追求するための条件検討をすることでお客様に心からご納得頂いた上で商品をお使い頂けるよう、様々な評価試験を行っています。
採用前の検討資料として、または採用後の最適条件検討資料としてご活用ください。
また、当データに関するご質問はお気軽にページ下部のフォームよりお問い合わせください。

目的

Roche High Pure Viral Nucleic Acid KitとGeneAll Ribospin vRD IIを用いて、Preservative Fluids^＊からの新型コロナウイルスの抽出とqPCRによる検出を行った。

下記のデータは、ジェネシスヘルスケア株式会社 様のご厚意により掲載させて頂きました。

実験手順

ロシュ・ダイアグノスティックス High Pure Viral Nucleic Acid Kit		GeneAll Ribospin™ vRD II
	2.5 mLのBinding Bufferに PolyAを50 μL添加し よく混合して、 Working Solutionを作成する		600 μLのBuffer NYLに PolyAを14 μL添加し よく混合する
	スワブ検体 200 μLに Working Solution（※）200 μL Proteinase K solutionを50 μL 加えて速やかに混合し 72℃で10 分インキュベート		スワブ検体 200 μLを加えて 10 secボルテックスし 室温で10 分インキュベート
	100 μLのBinding Bufferを 加えて混ぜる		350 μLのBuffer RB1を 加えて10 secボルテックス
	High Pure Filter Tubeを 回収用チューブに挿入して、 サンプルを High Pure Filter Tubeに移して8000×gで1 min 遠心 High Pure Filter Tubeを 回収用チューブから取り出して、回収用チューブと排出液を廃棄		カラムを チューブに挿入して、 サンプルを カラムに移して 10000×gで30 sec遠心 カラムを チューブから取り出して、 排出液を廃棄
	High Pure Filter Tubeを 新しい回収用チューブに挿入し、 500 μLの Inhibitor Removal Bufferを加えて 8000×gで1 min 遠心 High Pure Filter Tubeを 回収用チューブから取り出して、回収用チューブと排出液を廃棄		カラムを 元のチューブに挿入し、 500 μLの Buffer RBWを加えて 10000×gで30 sec遠心 High Pure Filter Tubeを 回収用チューブから取り出して、回収用チューブと排出液を廃棄
	High Pure Filter Tubeを 新しい回収用チューブに挿入し、 450 μLのWash Bufferを加えて 8000×gで1 min 遠心 High Pure Filter Tubeを 回収用チューブから取り出して、 回収用チューブと排出液を廃棄		カラムを 元のチューブに挿入し、 最大スピード（約13000×g）で 1 min 遠心 カラムを チューブから取り出して、 チューブと排出液を廃棄
	High Pure Filter Tubeを 新しい回収用チューブに挿入し、 450 μLのWash Bufferを加えて 8000×gで1 min 遠心 最大スピード（約13000×g）で 10 sec遠心 High Pure Filter Tubeを 回収用チューブから取り出して、 回収用チューブと排出液を廃棄		カラムを 新しい1.5 mLチューブに挿入し、 50 μLのElution Bufferを加えて 1 min 放置し、 室温10000×gで1 min 遠心
	High Pure Filter Tubeを 新しいヌクレアーゼフリーの 1.5 mL 反応チューブに挿入して、 50 μLのElution Bufferを加えて 8000×gで1 min 遠心

実験条件

• 陽性コントロール：
  200 μLのPreservative Fluids^＊へ5×10⁴濃度の陽性コントロール（国立感染症研究所より提供）を5 μL 添加
  最終的にqPCRにおいて10⁴/ 反応相当
• 陽性検体：
  陽性判定されたPreservative Fluids^＊で4℃保存されたもの（陽性保管検体）を使用
  トータル2 mLの陽性保管検体から200 μLを採り、検体を含まないPreservative Fluids^＊溶液で3倍希釈し、希釈液から200 μLを使用
• 溶出量： 50 μL
• リアルタイムPCR装置：qTOWER³（analytikjena Cat.No. 844-00553-2）
• 使用プレート：LightCycler® 480 Multiwell Plate 384 white（Roche Cat.No. 04729749001）
• qPCR反応試薬：One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix（Takara Cat.No. RR600A）n=2
• qPCR反応組成：
  　2×Master mix 　　　　　　  6.25 μL
  　Forward primer（10 μM） 　0.5   μL
  　Reverse primer（10 μM） 　0.7   μL
  　TaqMan probe（5 μM） 　　0.2   μL
  　DW 　　　　　　　　　　　2.85 μL
  　Template RNA 　　　　　 　2.0   μL　
  　Total 　　　　　　　　　　10.5   μL

結果

N2セットにおけるリアルタイムPCR波形

---

PDF版のダウンロードはこちら

リボスピン™ vRDⅡ| 日本ジェネティクス株式会社 製品検索

詳細を見る ▸