日本ジェネティクスのアプリケーションノートとは?
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メーカー名:日本ジェネティクス株式会社
下記のデータは、筑波大学大学院 生命環境科学研究科 生物機能科学専攻 深水研究室
金子 悠太 様、大徳 浩照 様のご厚意により掲載させて頂きました。
方法
FastGene™ Gel/PCR Extraction Kit (FG-91302) を使用したDNAの回収
サンプルの条件
1. 5.4 kb (プラスミドDNA/制限酵素処理後)
2. 1.5 kb (プラスミドDNA/制限酵素処理後)
手順
1. 0.7%アガロース電気泳動でDNA断片を分離した(結果①)
2. 目的断片を切り出し、1.5mLエッペンチューブに移した
3. FastGene™ Gel/PCR Extraction Kit(FG-91302)を使用してDNAを回収した
4. GP3バッファー 20μLで溶出後のDNA溶液の濃度を測定した(結果②)
5. 回収したDNA断片 100ng を電気泳動した(結果②)
結果
① キット回収前のアガロース電気泳動
〈矢印1〉5.4 kb、〈 矢印2〉1.5 kb それぞれを回収した
M1 :マーカー KAPA Express Ladder
A :サンプル
B :サンプル
M2 :マーカー λ/HindⅢ(市販品)
泳動条件:0.7%アガロース 100V 20min 1×TAE
② 回収したDNA断片の電気泳動とDNA量
回収DNA濃度(ng/μL) | 容量(µL) | DNA総回収量(ng) | 回収率(%) | |
---|---|---|---|---|
5.4 kb 断片プラスミド | 50.0 | 20 | 1000 | 約30 |
1.5 kb 断片プラスミド | 33.0 | 20 | 660 | 約60 |
M1 :KAPA Express Ladder(Cat.No.KK6304)
A :キットで精製した 5.4 kb 断片プラスミド
B :キットで精製した 1.5 kb 断片プラスミド
M2 :λ/HindⅢ(市販品)
泳動条件:0.7%アガロース 100V 20min 1×TAE
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回収DNAをその後の実験に用いて、以前と同様の結果が得られました。