【お客様事例】アガロースゲルからのプラスミドDNA(制限酵素消化断片)の抽出

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アプリケーションノート 2015<09>
製品名:FastGene™ Gel / PCR Extraction Kit(FG-91202, FG-91302)
メーカー名:日本ジェネティクス株式会社

下記のデータは、筑波大学大学院 生命環境科学研究科 生物機能科学専攻 深水研究室
金子 悠太 様、大徳 浩照 様のご厚意により掲載させて頂きました。

方法

FastGene™ Gel/PCR Extraction Kit (FG-91302) を使用したDNAの回収

サンプルの条件

1. 5.4 kb (プラスミドDNA/制限酵素処理後)
2. 1.5 kb (プラスミドDNA/制限酵素処理後)

手順

1. 0.7%アガロース電気泳動でDNA断片を分離した(結果①)
2. 目的断片を切り出し、1.5mLエッペンチューブに移した
3. FastGene™ Gel/PCR Extraction Kit(FG-91302)を使用してDNAを回収した
4. GP3バッファー 20μLで溶出後のDNA溶液の濃度を測定した(結果②)
5. 回収したDNA断片 100ng を電気泳動した(結果②)

結果

① キット回収前のアガロース電気泳動
〈矢印1〉5.4 kb、〈 矢印2〉1.5 kb それぞれを回収した

M1 :マーカー KAPA Express Ladder
A    :サンプル
B    :サンプル
M2  :マーカー λ/HindⅢ(市販品)
泳動条件:0.7%アガロース 100V 20min 1×TAE

 

② 回収したDNA断片の電気泳動とDNA量

  回収DNA濃度(ng/μL) 容量(µL) DNA総回収量(ng) 回収率(%)
5.4 kb 断片プラスミド 50.0 20 1000 約30
1.5 kb 断片プラスミド 33.0 20 660 約60

M1  :KAPA Express Ladder(Cat.No.KK6304)
A     :キットで精製した 5.4 kb 断片プラスミド
B     :キットで精製した 1.5 kb 断片プラスミド
M2  :λ/HindⅢ(市販品)
泳動条件:0.7%アガロース 100V 20min 1×TAE

お客様のコメント
DNAのサイズによらず、目的 DNA 断片が回収出来ました。
操作時間が短く、簡便で使いやすいです。
回収DNAをその後の実験に用いて、以前と同様の結果が得られました。

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