アプリケーションノートとは？
- 当社製品を実際にご使用頂いた、正真正銘、日本国内の研究者様による評価データ
- 製品をご検討中の方はもちろん、すでにお使いのお客様におかれましても、類似の研究をされている他の研究者の方の事例集としてご活用頂けます
アプリケーション検索専用ページはこちら
| アプリケーションノート 2017＜14＞ 製品名：FastGeneTM RNA Basic Kit（FG-80050, FG-80250） メーカー名：日本ジェネティクス株式会社 |
下記のデータは、国立研究開発法人 国立精神・神経医療研究センター 神経研究所 疾病研究第五部様のご厚意により掲載させて頂きました。
方法
| マウス由来のNeuroblastoma Neuro2a細胞を６つに分け（１チューブあたり1,000,000 cells）、それぞれ３つずつからQ社キットとFastGeneTM RNABasicキットによるRNA精製を行った。 RNA 1 μgをTOYOBO社のReverTra Aceを用いて20 μLの反応系で逆転写した。 逆転写反応サンプルをMQ水で20倍希釈し、１ μLをqPCR に供した。 qPCR反応にはTOYOBO社のTHUNDERBIRD SYBR qPCR Mixを用い、actinおよびGeneAを目的遺伝子としてApplied Biosystems社7300 Real-Time PCR Systemで増幅、測定した。 |
 |
|
条件 |
||
| 1．RNA精製 サンプルの種類 ：Neuro2a細胞（マウス由来Neuroblastoma） サンプル量 ：1.0×106 cells / prep RNA精製キット ：①Q社キット、②FastGeneTM RNA Basic Kit（各 n=3） DNase I 処理 ：①、②とも未実施 RNA溶出バッファー量 ：①、②とも30 μL 2．逆転写反応 インプットRNA量 ：1 μg（1反応20 μLあたり） 逆転写酵素 ：ReverTra Ace（TOYOBO社） |
||
| 反応組成 ： total RNA 1 μg Random Primers (25 pmoles/μl) 1 μl 5×Buffer 4 μl 10mM dNTPs 2 μl ReverTra AceR (100units/μl) 1 μl （Total Volume 20 μl） |
反応プログラム： アニーリング 30℃・10 min ↓ 酵素反応 42℃・30 min ↓ 変性 99℃・5 min |
|
| 3．リアルタイムqPCR インプットｃDNA量 ：20倍希釈した逆転写反応液1 μL（1反応 20 μLあたり） ｑPCR試薬 ：THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix（TOYOBO社） ｑPCR装置 ：Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System |
||
結果
収量と純度
| yield | purity | NanoDrop （Thermo ScientificTM 社）にて測定 |
||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| RNA sample | (μg) | Mean (μg) | A260/280 | A260/280 | ||
| Q 社 | 1 | 17.6625 | 18.7547 | 2.05 | 2.31 | |
| 2 | 18.4535 | 2.05 | 2.47 | |||
| 3 | 20.1480 | 2.04 | 2.50 | |||
| FastGeneTM | 1 | 18.9745 | 19.8202 | 2.08 | 2.33 | |
| 2 | 21.4340 | 2.06 | 2.49 | |||
| 3 | 19.0520 | 2.07 | 2.42 | |||
Q社キットとの比較において、収量、純度ともほとんど差はない。
qPCR結果 1：actin
| Sample | Ct | Mean | Mean Ct | StdDev Ct | P value | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Q 社 | 1 | 16.1606 | 16.1369 | 16.3551 | 0.29728 | 0.11140 |
| 16.2475 | ||||||
| 16.0027 | ||||||
| 2 | 16.2128 | 16.2347 | ||||
| 16.3102 | ||||||
| 16.1810 | ||||||
| 3 | 16.7193 | 16.6937 | ||||
| 16.5803 | ||||||
| 16.7815 | ||||||
| FastGeneTM | 1 | 15.9163 | 15.8943 | 15.8970 | 0.05795 | |
| 15.8641 | ||||||
| 15.9024 | ||||||
| 2 | 15.9028 | 15.9563 | ||||
| 15.8711 | ||||||
| 16.0950 | ||||||
| 3 | 15.9139 | 15.8405 | ||||
| 15.8597 | ||||||
| 15.7479 | ||||||
qPCR結果 2：Gene A
| Sample | Ct | Mean | Mean Ct | StdDev Ct | P value | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Q 社 | 1 | 21.7528 | 21.7298 | 21.9913 | 0.34464 | 0.17405 |
| 21.5308 | ||||||
| 21.9058 | ||||||
| 2 | 22.3860 | 22.3819 | ||||
| 22.5230 | ||||||
| 22.2366 | ||||||
| 3 | 21.5057 | 21.8623 | ||||
| 22.2444 | ||||||
| 21.8369 | ||||||
| FastGeneTM | 1 | 21.4406 | 21.4551 | 21.5940 | 0.13235 | |
| 21.5040 | ||||||
| 21.4208 | ||||||
| 2 | 21.2879 | 21.6081 | ||||
| 21.8181 | ||||||
| 21.7182 | ||||||
| 3 | 21.9397 | 21.7187 | ||||
| 21.5256 | ||||||
| 21.6908 | ||||||
Q社キットとの比較において、qPCRの結果もほとんど差がない（P＞0.05）。
Q社製品をこれまで用いてきたが、FastGeneTM RNABasicキットは操作性も良く、また収量、純度も遜色ない結果が得られた。
- こちらのアプリケーションノートのPDFダウンロード ： こちら
- 製品情報詳細ページ： FastGene™ RNA精製キット
- アプリケーションノート検索ページ（型番・キーワード・アプリケーションから検索可能）
